Mutacja przyrostu masy Med12 powoduje mięśniaki gładkie i niestabilność genomu ad

Najpierw ustaliliśmy, czy warunkowa inaktywacja Med12 powoduje mięśniaki gładkie. Ponieważ Med12 ulega ekspresji z chromosomu X, losowa inaktywacja chromosomu X prowadzi do losowej ekspresji macierzystego lub matczynego locus Med12 w macicznych komórkach macicy. Przeszliśmy przez Cre (Amhr2-Cre) (10) sterowany receptorem hormonu typu Mullerian (10) za pomocą Med12fl / fl zwierząt (9) w celu wytworzenia zwierząt Med12fl / + Amhr2-Cre i zbadano wpływ niedoboru Med12 w subpopulacji macicy mezenchymalnej komórki. Zastosowanie zwierząt Med12fl / +, w których allel jest floxed, a drugie jest WT, pozwoliło nam, w obecności rekombinazy Amhr2-Cre, na wygenerowanie populacji mozaikowej komórek, które eksprymują lub nie zawierają Med12. Ponieważ Amhr2-Cre działa dobrze po ustaleniu inaktywacji chromosomu X (E6.5) (11), utrata funkcji Med12 nie doprowadzi do wypaczonej inaktywacji X myszy w macicy. Aby ocenić rekombinację Cre w naszych rękach, skrzyżowaliśmy myszy Amhr2-Cre z podwójnie fluorescencyjnym Cre-reporterem myszy mT / mG (12), które wyrażają czerwoną fluorescencję we wszystkich tkankach i zieloną fluorescencję po rekombinacji Cre. Biorąc pod uwagę nasze wyniki (dodatkowa postać 1, A i B, materiał uzupełniający dostępny online w tym artykule: doi: 10.1172 / JCI81534DS1), ustaliliśmy, że około 60% macicznych komórek mezenchymalnych zostało poddanych zabiegowi z udziałem Cre. Rekombinacja allelu Med12fl i redukcja transkryptów mRNA Med12 zostały potwierdzone w Med12fl / + Amhr2-Cre uteri (Supplemental Figure 1, C. E). W macicach dorosłych myszy Med12fl / + Amhr2-Cre nie obserwowano tworzenia się mięśniaków ani hiperplazji (Supplemental Figure 1, G and I). Wyniki te wskazują, że utrata funkcji Med12 nie jest mechanizmem powstawania mięśniaka gładkiego. Ekspresja Med12 c.131G> Wariant na tle warunkowego Med12 KO powoduje mięśniaki gładkie. Najczęstszą mutacją MED12 w mięśniakach gładkich u kobiet amerykańskich jest wariant niesynonimiczny, c.131G> A, przewidywany jako substytut silnie konserwowanej glicyny z aminokwasem asparaginowym (p.Gly44Asp) (7). Zbadaliśmy, czy ta mutacja Med12 powoduje tworzenie się mięśniaka gładkiego przez wytworzenie zmutowanego mutanta myszy z mutantem Med12 (Supplemental Figure 2, A i B). Zaprojektowaliśmy wariant c.131G> A do mysiego cDNA Med12 (Med12mt) połączonego ze znacznikiem FLAG, subklonowano go do wektora pROSA26-DV1 i zintegrowano z autosomalnym locus genomowym ROSA26. Obecność reportera FLAG pozwoliła nam na odróżnienie ekspresji zmutowanego Med12 od WT Med12 (Dodatkowa Figura 2, D i F). Wytworzone myszy były heterozygotyczne pod względem zmutowanego cDNA Med12 w locus ROSA26 (Med12Rmt / +). Pokrewniliśmy myszy Med12Rmt / + z myszami Amhr2-Cre w celu warunkowej ekspresji zmutowanego Med12 (c.131G> A) już w E13.5 w mysiej macicy macicy (10). Zbadaliśmy, czy u myszy, które eksprymują odmiana Med12 c.131G> A na warunkowym tle KO, badaliśmy mięśniaki gładkie macicy (Ryc. 1A)
[hasła pokrewne: jak ugotowac kasze jeczmienna, sanatorium busko zdrój krystyna, imbir na przeziębienie przepis ]
[patrz też: dna moczanowa leczenie ziołami, wanted ścigani cda, rezonans magnetyczny kraków cennik ]