Obwód neuroepitelialny utworzony przez unerwienie czuciowych komórek enteroendokrynnych cd

Komórki enteroendokrynne Cck-GFP i Pyy-GFP mają neuropod, przez który kontaktują się z włóknami nerwowymi. (A) Nerw neurofilamentowy (NFM) (czerwony) łączy się z jelitową komórką Pyy-GFP (zielona). (B) Nerw kalbindyny (Calb) unerwia neuropodę komórki Pyy-GFP jelita grubego. (C) Komórka Pyy-GFP w jelicie grubym rozszerza swój neuropod, aby połączyć się z nerwami neurofilamentowymi i CGRP. (D) Schemat kokultowy komórki enteroendokrynnej i pierwotnych neuronów czuciowych. EWG, komórka enteroendokrynna; TG, neuron trójdzielny. (E) Sekwencja poklatkowa pokazująca, w jaki sposób pojedyncza komórka enteroendokrynna Cck-GFP (zielona) łączy się z neuronem czuciowym (znakowany DiI, czerwony) in vitro. Materiał wideo jest prezentowany w Supplemental Video i 2. (F) Połączenie neuronalne komórki enteroendokrynnej jest stabilne po 23 minutach, 14 sekundach, a komórki pozostają połączone przez 88 godzin do końca eksperymentu. Czas, godziny: minuty. Paski skali: 10 .m. Związek z neuronami czuciowymi jest rekapitulowany in vitro. Aby przetestować specyficzność tego połączenia, opracowaliśmy metodę hodowli komórek enteroendokrynnych i neuronów czuciowych (ryc. 1D). Komórki enteroendokrynne wyizolowano i oczyszczono metodą FACS z jelita cienkiego myszy Cck-GFP (14), a neurony czuciowe zdysocjowano enzymatycznie ze zwojów nerwu trójdzielnego lub grzbietowego myszy typu dzikiego (15). Po wyizolowaniu komórki enteroendokrynne i neurony czuciowe hodowano i obrazowano przez kilka dni przy użyciu mikroskopu z inkubatorem fluorescencyjnym (Figura 1D). Figura 1, E i F przedstawia reprezentatywną sekwencję poklatkową zdarzeń po wysianiu pojedynczych komórek enteroendokrynnych i neuronów czuciowych razem. Pełne wydarzenie jest udokumentowane w Suplemencie Wideo 1. Po 11 godzinach, 55 minutach obserwuje się komórkę enteroendokrynną (Cck-GFP, zielony) leżącą obok neuronu (lipofilowy DiI, czerwony). Następnie neuron wydłuża mały neuryt (strzałka) w kierunku komórki enteroendokrynnej (12 godzin, 4 minuty), a komórka enteroendokrynna odpowiada wydłużeniem procesu cytoplazmatycznego w kierunku neuronu (13 godzin, 14 minut), który łączy się z neuronem. neuryt (14 godzin, 25 minut). Neuron zmysłowy kontynuuje rozszerzanie przypuszczalnego aksonu, podczas gdy komórka enteroendokrynna pozostaje połączona (23 godziny, 18 minut). W tym przykładzie komórka enteroendokrynna i neuron pozostały połączone aż do zakończenia eksperymentu po 88 godzinach. Dodatkowy przykład pokazano w Uzupełniającym wideo 2. W tym przypadku neuron wyraźnie wydłuża akson, który łączy się z odległą komórką enteroendokrynną. Materiał w obu przykładach jest unikalny, ponieważ zawiera informacje, które można docenić tylko obserwując sekwencję w ruchu. Ten rodzaj interakcji nie był widoczny w eksperymentach kontrolnych, gdy komórki enteroendokrynne były hodowane wspólnie z komórkami nabłonkowymi nie-GFP lub nieśmiertelnymi komórkami HEK.
[przypisy: czynniki ryzyka chorób układu krążenia, ciałka ketonowe, młody jęczmień odchudzanie efekty ]
[hasła pokrewne: schuring, młody jęczmień odchudzanie efekty, ciałka ketonowe ]