Powtarzająca się dominująca negatywna mutacja E47 powoduje agammaglobulinemię i BCR Komórki B. ad 5

W podobny sposób, gdy komórki HEK-293 transfekowano konstruktem reporterowym lucyferazy kierowanym przez sekwencję AE5-AE2 plus wektory ekspresyjne dla typu dzikiego i / lub zmutowanego E47, połączone wektory dawały sygnał, który wynosił 10%. tego obserwowanego w przypadku E47 typu dzikiego (Figura 3C). Zdolność E555K do wiązania DNA jako heterodimeru z MyoD była oceniana przez EMSA przy użyciu sondy z regionów regulatorowych kinazy kreatyninowej. Ten specyficzny tkankowo czynnik transkrypcyjny bHLH homymizuje słabo i wymaga białka E jako heterodimerycznego partnera wiążącego DNA (11). Chociaż E555K E47 nie wiązał się z sondami E5 lub kinazą kreatyniny jako homodimerem, umożliwił MyoD związanie się z sondą kinazy kreatyninowej (Figura 3D). Preinkubacja ekstraktów jądrowych z przeciwciałem E47 lub MyoD spowodowała superskokcję kompleksu MyoD-DNA (Figura 3D). Zdolność mutanta E47 do umożliwienia wiązania DNA przez specyficzne tkankowo białko bHLH nie było specyficzne dla mutacji E555K, ale był również obserwowany dla mutacji utworzonej in vitro (R556K), która jak wcześniej wykazano hamowała wiązanie DNA przez typ dziki. E47 (12). Myszy, które są zerowe dla E2A, pozbawione zarówno E12, jak i E47, mają słabą żywotność w okresie okołoporodowym i demonstrują całkowity blok w rozwoju komórek B na najwcześniejszych etapach różnicowania (7, 8). Myszy, które przeżyły, mają nieprawidłowości w rozwoju limfocytów T i wysoką częstość występowania chłoniaków z komórek T (17). Myszy, które są zerowe dla E47, ale nie E12, mają normalną żywotność, ale mają mniej niż 1% komórek linii B w szpiku kostnym i śledzionie (18). Jednak myszy, które nie mają E12, ale nie E47, mają normalną liczbę komórek B (18). Myszy, które są heterozygotyczne pod względem mutacji zerowych w E2A, E47 lub E12 mają normalną liczbę komórek B B220 +. Możliwe, że szkodliwe mutacje w egzonach wspólnych dla E12 i E47 powodują u ludzi embrionalny, śmiertelny fenotyp, podczas gdy mutacje specyficzne dla egzonu E12 mogą nie mieć łatwo rozpoznawalnego fenotypu. Somatycznie nabyte mutacje aktywujące w domenie bHLH E47 zostały niedawno zgłoszone u pacjentów z chłoniakiem Burkitta; jedna z tych mutacji, E555Q, wystąpiła w tej samej parze bazowej, na którą miała wpływ mutacja E555K (19). Natomiast heterozygotyczna utrata całego locus E2A jest powszechna w zespole Sézary ego (20), podtypie chłoniaka z komórek T. Żaden z pacjentów włączonych do tego badania (od 10 do 40 lat) nie miał chłoniaków ani zakażeń typowych dla wad komórek T. Szczegółowa analiza immunofenotypu komórek T i TCR V. repertuar u 2 pacjentów był podobny do obserwowanego u pacjentów z mutacjami w BTK (odnośnik 21 i Supplemental Figure 1, materiał uzupełniający dostępny online w tym artykule; doi: 10.1172 / JCI71927DS1). Mutacja E555K w E47 ma działanie, które różni się od działania obserwowanego u wszystkich myszy z nokautem związanym z E2A, ponieważ powoduje wytwarzanie stabilnego białka, które jest zdolne do dimeryzacji z innymi białkami bHLH.
[przypisy: poradnia preluksacyjna łódź, odchudzanie przez bieganie, rezonans magnetyczny kraków cennik ]
[przypisy: poradnia preluksacyjna łódź, rezonans magnetyczny pleszew, odkleszczowe zapalenie opon mózgowych ]