Repertuar komórek T po autologicznym transplantacji komórek macierzystych w stwardnieniu rozsianym ad

Ogólnie, ani naive, ani pamięć komórek T CD4 + nie powróciły do wartości wyjściowych w ciągu 24 miesięcy (P = 0,035 i P <0,0001, odpowiednio, dodatkowa Figura 1, A i C). W przeciwieństwie do tego, naiwne limfocyty T CD8 + powróciły do wartości wyjściowych o 24 miesiące (P = 0,2184), a komórki T pamięci CD8 + powróciły do wartości wyjściowych o 6 miesięcy (P = 0,7754) (dodatkowa Figura 1, B i D). Zgodnie z wcześniejszymi badaniami (8), odtworzenie komórek odzwierciedlało odchylenie w kierunku komórek fenotypu pamięci, szczególnie w linii CD8, gdzie to pochylenie zostało zachowane nawet w 1-2 roku po przeszczepie, w punktach czasowych, w których liczba komórek powróciła do wartości wyjściowych. Zastosowaliśmy technologię następnej generacji do sekwencjonowania TCR. łańcuchy miliona posortowanych komórek T CD4 + i CD8 + od każdego pacjenta przed przeszczepem i rok po przeszczepie (ultra-głębokie sekwencjonowanie), a także 200 000 komórek T CD4 + i CD8 + w 2 miesiące po przeszczepie (głębokie sekwencjonowanie z powodu niższej liczby krążącej limfocytów T ). Ogólnie rzecz biorąc, od 24 włączonych pacjentów uzyskaliśmy produktywne TCR. sekwencja odczytuje z blisko 100 milionów limfocytów T (Tabela uzupełniająca 1). Aby zwizualizować dużą ilość danych generowanych przez sekwencjonowanie, binkowaliśmy klony na podstawie ich użycia VJ (tj. Kombinacji któregokolwiek z genów 54 V z dowolnym z 13 genów J). Jak pokazano w przykładzie dotyczącym limfocytów T CD4 + (uzupełniająca figura 2A), zaobserwowano względną dominację ograniczonej liczby kombinacji VJ we wcześniejszym (2 miesiące) punkcie czasowym po HSCT, a następnie pojawienie się bardziej zrównoważonego użycia przy 12 miesiące po terapii. Analiza głównych składników wykazała, że względne częstotliwości kombinacji VJ obu komórek CD4 + i CD8 + skupiały się wyraźnie dla każdego punktu czasowego przed i po przeszczepie (dodatkowa figura 2B). W przypadku limfocytów T CD4 + 12-miesięczne punkty danych ponownie zbliżyły się do wartości bazowych, co sugeruje, że rozległe skrzywienie TCR zaczęło się rozwiązywać. Natomiast w przypadku komórek CD8 + wystąpiło znaczne rozproszenie 12-miesięcznych próbek po HSCT, które zostały zdyspergowane w klastrach bazowych i 2-miesięcznych, co sugeruje wysoki stopień zmienności międzyosobniczej. Aby przeanalizować odzyskanie repertuaru immunologicznego po HSCT, przeanalizowaliśmy każdy klonogram zidentyfikowany w bibliotekach odczytów TCR i każdą częstość klonalną obliczono jako ułamek całej biblioteki dla każdej próbki (dalsze szczegóły w Metodach). Wszystkie klony z każdej próbki zostały następnie uszeregowane w 4 grupach według ich częstotliwości, od 1+ lub. Singletonu. (Klony, które można założyć, że pochodziły z pojedynczej komórki) do 4+, lub. top 100. klonów, z jednym przykładem pokazanym na Figurze 1A i obszernym streszczeniem dla wszystkich pacjentów pokazanych na Figurze 1B. Figura Analiza proporcjonalna poszczególnych częstotliwości klonalnych limfocytów T po HSCT
[hasła pokrewne: dna moczanowa leczenie ziołami, rezonans magnetyczny kraków cennik, rezonans magnetyczny pleszew ]
[hasła pokrewne: leki przeciwhistaminowe iii generacji, udar pnia mózgu, schuring ]