Sekwencjonowanie exome ujawnia mutację MCM8, która jest przyczyną niewydolności jajników i niestabilności chromosomów cd

WES ujawniło 2 niesynonimowe warianty, FERMT1 (MIM 607900) i MCM8 (MIM 608187), które spełniały kryteria autosomalnego recesywnego filtra dziedziczenia i mapowane do regionu homozygotyczności z najwyższym wynikiem LOD na chromosomie 20. Wariant FERMT1 (NM_017671: c.293G > A, p.R98H) został wcześniej zgłoszony (rs137862671) w publicznych bazach danych i prawdopodobnie jest wariantem łagodnym. Patogenne warianty w FERMT1 powodują zespół Kindlera (MIM 173650) i żadne z objawów zespołu Kindlera (tj. Wrodzone pęcherze, zanik skóry, nadwrażliwość na światło, kruchość skóry, łuszczenie się) odnotowano w badanej tu rodzinie. Wariant missense MCM8 (NM_032485) c.446C> G pozostał jako jedyny kandydat do zaobserwowanego fenotypu. MCM8 c.446C> G nie został zgłoszony w bazach danych Exome Variant Server lub 1000 Genomes. Wariant MCM8 c.446C> G został zweryfikowany w rodzinie przez sekwencjonowanie Sanger (Figura 1B) i był nieobecny u 200 płodnych kobiet. Otrzymana mutacja białka, p.P149R, występuje w wysoce konserwatywnej reszcie zlokalizowanej w N-końcowej domenie wiążącej DNA MCM8 (Figura 1C i dodatkowa Figura 2). Fibroblasty myszy z niedoborem Mcm8 wykazywały nadwrażliwość na środki, które indukują pęknięcia dsDNA i sieciowanie DNA, co skutkuje wyższą liczbą złamanych chromosomów, cechą charakterystyczną niestabilności genomu (5). Przebadaliśmy możliwości naprawy DNA hodowanych fibroblastów pochodzących od dotkniętych i nie dotkniętych chorobą członków rodziny (Figura 2, ACH i odnośnik 6). Fibroblasty z nietkniętej siostry IV-3 (genotyp WT) wykazywały kilka pęknięć chromosomalnych przy 150-nM i 300-nM stężeniach mitomycyny C (MMC) (Figura 2, A i D). Komórki z III-2 (nie dotknięta matka, heterozygotyczna WT / MT) wykazywały znacząco zwiększoną liczbę pęknięć chromosomowych na komórkę w porównaniu z komórkami z IV-3 (nienaruszona siostra, genotyp WT) we wszystkich stężeniach MMC (Figura 2, B i D): 50 nM (0,9. 0,3 vs. 0,1. 0,1, P = 0,02), 150 nM (5,3. 0,4 vs. 2,6. 0,3, P <0,001) i 300 nM (8,1. 0,5 vs. 5,0. 0,4, P <0,001). W przypadku obu dotkniętych siostrami (IV-1 i IV-6, homozygotyczny MT / MT) liczba pęknięć chromosomów na komórkę była co najmniej 8. 10-krotnie wyższa niż w przypadku heterozygotycznych nosicieli (Figura 2, C i D, P <0,01 ). Przy 150 nM MMC, średnio 22,4. 1,5 i 15,4. 0,8 złamań chromosomu na komórkę zaobserwowano odpowiednio dla dotkniętych sióstr IV-1 i IV-6 (P <0,001). Zaobserwowaliśmy ponad 50 złamań chromosomu na komórkę przy 300 nM ekspozycji na MMC w komórkach z dotkniętych sióstr IV-1 i IV-6 (P <0,001). W większości komórek homozygotycznych pod względem mutacji obserwowaliśmy wiele złożonych aberracji chromosomowych (ryc. 2, C i D). W związku z tym mutacja homozygotyczna MCM8 c.446C> G utrudnia naprawę pęknięć chromosomalnych wywołanych MMC
[hasła pokrewne: wstrzykiwacz do insuliny, rezonans magnetyczny kraków cennik, olej z konopii indyjskiej opinie ]
[podobne: odkleszczowe zapalenie opon mózgowych, chlorowodorek pseudoefedryny, jedzenie niskokaloryczne ]